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3’端标记有bhq2荧光淬灭基团;上述taqman探针(cpiv-p)的5’端标记有hex荧光报告基团,3’端标记有bhq2荧光淬灭基团。本发明的另一方面提供一种用于对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行四重实时荧光定量pcr检测及鉴别的试剂盒,包括上述的引物和taqman探针组;使用上述试剂盒时的25μl实时荧光定量pcr检测体系中所述引物和taqman探针的用量推荐为:10μm的4×混合引物μl,10μm的4×混合探针μl,其中所述4×混合引物为cav2-f、cav2-r、cdv-f、cdv-r、cpv-f、cpv-r、cpiv-f、cpiv-r的等浓度混合,推荐地,其中各引物的浓度为10μm,所述4×混合探针为cav2-p、cdv-p、cpv-p、cpiv-p的等浓度混合,推荐地,其中各探针的浓度为10μm。上述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品,阳性对照品为犬腺bingduii型,青山区细小病菌收费标准、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu的基因组dna或rna,各阳性对照品为单一包装或混合包装,阴性对照品为不含犬腺bingduii型,青山区细小病菌收费标准、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu的反应体系,青山区细小病菌收费标准,如h2o(双蒸水、无菌去离子水等)。汉阳有哪些好的宠物医院?青山区细小病菌收费标准
下游引物):5’-cattactgagaacaatccgtaggc-3’(序列表中sedid6);cav2-p(taqman荧光探针):5’-quasar705-gtcttctgccaacatgctttatccc–bhq3-3’(序列表中sedid7)。cav2-p的报告荧光基团为quasar705,荧光淬灭基团为bhq3。cdv-p(taqman荧光探针):5’-cy5-cctttggaggaggacagttgccttcttat-bhq2-3’(序列表中sedid8)。cdv-p的报告荧光基团为cy5,荧光淬灭基团为bhq2。cpv-p(taqman荧光探针):5’-fam-atggcaaacaaatagagcattgggcttacc-bhq2-3’(序列表中sedid9)。cpv-p的报告荧光基团为fam,荧光淬灭基团为bhq2。cpiv-p(taqman荧光探针):5’-hex-actgcaagatcagagtgaggaaggtacaatcc-bhq2-3’(序列表中sedidno:20)。cpiv-p的报告荧光基团为hex,荧光淬灭基团为bhq2。为防止pcr扩增时被延伸,所述探针的3’端已经磷酸化处理。实施例2、cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测、提取基因组dna或rna使用axypreptmbodyfluidviraldna/rnaminiprepkit(axygen公司)对cav-ii、cpv、cdv和cpiv的细胞培养物(用于获得标准品和阳性对照)以及待测样品提取基因组dna或rna,具体方法包括以下步骤:(1)axygen试剂盒准备:按试剂盒说明书。青山区细小病菌收费标准武汉阳逻的动物医院。
比熊犬(详情介绍)比熊犬有时要面临着许多疾病的威胁,犬细小病du(翻肠子)就是其中对比熊伤害非常大的一种疾病。犬细小病du是目前国内仅次于犬瘟热的致死率很高的传染病,以频繁呕吐、出血性腹泻和迅速脱水为突出症状。染上幼犬的死亡率高达50%—。下面就为大家介绍一下比熊犬细小病du性肠炎的治聊方法。一、比熊犬细小病du性肠炎症状比熊犬染上本病后经过1-2周的潜伏期,表现为典型的严重的出血性胃肠炎症状,其呕吐、腹泻和脱水方面分别具有以下特点:1.呕吐:病初比熊犬首先表现呕吐,一般先呕吐胃内未消化食物,随后的呕吐物多为清水和黏液,往往含有黄绿色的胆汁。同时食欲废绝,饮欲强烈,饮后立即呕吐,体温高达40摄氏度左右。2.腹泻:比熊犬频繁呕吐1—2天后出现腹泻,粪便由软到稀,而后带血,呈番茄汁样血便,有特殊腥臭味,可迅速弥漫整个空间。3.脱水:胃肠炎症状出现24—48小时后迅速脱水和体重减轻,随后比熊犬眼球凹陷,皮肤弹性减退,衰弱无力。血液检查红细胞压积增加,白细胞减少。二、为什么比熊会得上细小病du性肠炎一般是比熊接触了其他带病犬,通过尿液、粪便、唾液或呕吐物交叉染上。同时食物、饮水用具也可以传染细小病du。
发现本病应立即进行隔离饲养。防止病犬和病犬饲养人员与健康犬接触,对犬舍及场地用2%火碱水或10-20%漂白粉等反复消毒。要特别提醒的是,如果您家曾有发生此病的小狗,即使环境已经消毒,也千万不要再把没有打过全部疫苗的其他小狗带回家,否则很快就会传染发病。临床上主要是对症治聊配合高免血清和单克隆抗体治聊(针对早期病情较为轻,单克隆抗体效果高于高免血清)。成犬治yu率高于幼犬,串种犬治yu率高于血统犬(血统犬大多为近亲交配所得,免疫li低下),幼犬预后谨慎。在病发后严格控制饮食,禁食禁水,通过输液等方式防zhituo水。由于此时病犬肠胃功能紊乱,功能停止,喂食只能增加负担,导致病情严重,口服葡萄糖和氯化钠等方式无任何治聊意义,切勿强灌。病犬在四十八小时内不再呕吐腹泻,可试探性喂食易消化食物,比如泡软,小米汤。止血常维生素K3、安络血或止血敏;一般4~6小时一次,可同时或单独应用。止吐常用爱茂尔、胃复安等。止泻可用泻痢停、药用碳、腐敏、维迪康等。控制继发染上可用kangjun类药wu,如青霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、丁胺卡那霉素、硫suan小诺霉素、四环素和红霉素等。强心主要用强尔心、樟脑磺酸钠或等。武汉科道宠物医院!!
末了通过标准曲线对未知模板进行定量分析(heidca,stevensj,livakkj,;6(10):986-94.)。实时荧光定量pcr技术是一种对bingdu基因组进行检测的相对定量技术,与普通pcr技术相比,增加了一个两端带有荧光标记的寡核苷酸探针,具有灵敏度高、特异性强、重复性好、定量准确的优点,可以利用多种荧光基团实现多种基因的检测,并可利用中间的寡核苷酸探针实现相似性较高基因的鉴别。本发明基于以上基本原理针对四种bingdu设计了四对特异性引物和四条寡核苷酸探针,利用碱基互补配对的原理,建立了一种特异性检测cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测方法,并基于设计得到的特异性引物和探针提供一种能同时检测和鉴别cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测试剂盒。通过以下具体实施方式详细说明本发明。下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法,具体步骤可参见:《分子克隆实验指南》(《molecμlarcloning:alaboratorymanual》sambrook,j.,russell,davidw.,molecμlarcloning:alaboratorymanual,3rdedition,2001,ny,coldspringharbor)。所述百分比浓度如无特别说明均为质量/质量(w/w,单位g/100g)百分比浓度、质量/体积(w/v。宠物医院断血线价格!青山区细小病菌收费标准
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上述待测样品包括用于疫苗生产的原料、疫苗半成品及成品。基于以上技术方案提供的用于鉴别检测犬腺bingduii型(cav-ii)、犬细小bingdu(cpv)、犬瘟热bingdu(cdv)和犬副流感bingdu(cpiv)的四重实时荧光定量pcr检测试剂盒及其引物和taqman探针能同时对cav-ii、cpv、cdv和cpiv实施快速鉴别和定量检测,可用于疫苗生产过程中原料毒株的筛选、质量监控和合理化配苗(如评估配制疫苗抗原的准确含量,为疫苗抗原含量提供数据基础),确保疫苗接种的安全性和合理性,对cav-ii、cpv、cdv和cpiv疫苗的生产具有指导作用。还可以对犬只源细胞质量进行监控,并为后续处置提供客观数据,以保证犬只源细胞及其制品的安全性。还可以为临床病原主要流行情况的调查提供有力依据。本发明的试剂盒和检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好,可以同时实现对cav-ii、cpv、cdv和cpiv的定性检测和准确定量,将在样本中cav-ii、cpv、cdv和cpiv的准确检测及在疫苗生产、犬只制品生产(非诊断目的的应用)中发挥重要作用,应用前景广阔。附图说明图1为本发明用实时荧光定量pcr技术对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行定性、定量、鉴别检测的技术路线。青山区细小病菌收费标准
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