实验一 广州大学城亚运场馆区空气微生物检测与微生态安全分析
一 实验目的
1．掌握空气微生物的采集方法。
2．熟悉空气微生物中的细菌和真菌的鉴定方法。
3．获取广州大学城亚运场馆区空气微生物数量,以评价广州大学城空气微生态安全。
二 实验原理
空气是人类赖依生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒和放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自地面及设施、人和动物的呼吸道、皮肤和毛发等，它附着于空气气溶胶细小颗粒物表面,可较长时间停留于空气中。某些微生物还可随空气中细小颗粒物穿过人体肺部存留在肺的深处，对身体健康带来严重危害,也可随空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量,是空气环境污染的一个重要参数。
由于广州气候温暖、潮湿，很适合微生物的生长与繁殖，加上大学城人口密集度高、含尘量大，其空气质量更可能受到微生物污染。本实验于亚运会前后两个时间段对广州大学城12个亚运场馆区的入口处进行了空气微生物污染状况的调查，以评价广州大学城空气微生态安全以及亚运会承办对空气微生态的影响。
三 实验材料与方法
3.1 研究地点
空气样品采自广州亚运会大学城比赛场地（ ）， 样点具体情况见表1。 3.2 两种培养基配置
牛肉膏培养基
蛋白胨 10 g，牛肉膏 3 g，氯化钠 5 g，水 1000 mL，pH至7.4-7.6。（灰白色，用于细菌分离）
马丁氏培养基 K2HP4·3H2O 1 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，蛋白胨 5 g，葡萄糖 10 g，1/30 000孟加拉红水溶液 100 mL，水900 mL，自然pH，121°C 湿热灭菌30 min。待培养基融化后冷却至55-60 °C时加入链霉素(30 µg/mL)。（粉红色，用于真菌分离）
3.3 采样时间和方法
1
生态学实验讲义 使用班级：生物科学08级/能源与环境生物技术08级
在广州亚运会前后，各采集2次，每次使用4个平板（即同一地点先后共计采样四次）。采样高度离地面1.5—2米。本实验全部采用降落—平板技术，沉降时间为10分钟。培养基培养温度一律为30℃，培养时间为24—48小时。
采样注意事项
1） 将采样支架带到体育场馆门口，在场馆区入口处预选择4个代表性样点，记录样区特征，填入表1。
2）采集前将采样支架平放，操作者戴上口罩和手套，从保鲜袋中取出两类平板：A（灰白色，用于细菌收集培养），B（粉红色，用于真菌收集培养），平放在支架上方的塑料篮中，向上平放打开盖子，盖子仍放在篮子中，沉降法收集空气微生物10 min后，盖上玻璃盖，仍放回保鲜袋中包好。
3）按上述方法，完成另外三个重复组的采样工作。 4）带回实验室，进行培养。
1.4 平板菌落计数
对所收集的每一平板菌落进行细菌和霉菌的计数。由于此实验是日观测,且重复次数较多、量多， 所以仅归列出各功能区上午、中午和晚上的平均数以及日平均数。计数采用奥梅梁斯基公式。
E = N*100/A*5/T*1000/10=5000N/AT 其中：E 每立方米空气中菌落数 cfu/m3
N 经培养后培养基上各类菌的菌落数 A 平皿面积 cm2 T 暴露时间 min
本试验中，A=3.14*4.5*4.5 cm2，T=10min，
2 结果
2.1 监测点基本情况见表1。
表1 监测点基本情况
监测采样点 人(车)流量 绿化情况 自然通风状况 地理位置 ( )a
( )b ( )c ( )d
我们依据人流量、车流量、自然通风状况、绿化情况和地理位置等条件，选择该体育馆等4个监测点为本次空气微生物的采集对象。
2.2 城区主要交通枢纽空气微生物浓度测定 见表2。
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生态学实验讲义 使用班级：生物科学08级/能源与环境生物技术08级
表2 广州城区主要交通枢纽空气微生物浓度（单位：cfu/m3）
监测采样点 细菌 真菌 总菌 真菌/总菌 ( )a
( )b ( )c ( )d
由表2可见,…………
3 讨论
针对实验结果展开讨论。
4 参考文献
列举所参考的文献。
附1：2010年广州亚运会大学城比赛场地（12个）
大学城中山大学体育馆，位于广州大学城的中大体育馆可容纳4386个座席，亚
运期间排球比赛将在这里举行。（点1）
大学城华南理工大学体育场，华工体育场位于广州大学城，扩建后场馆可容
纳5634个座席。这里也将举行亚运会的足球比赛。（点2）
大学城华南理工大学体育馆，位于广州大学城，场馆容纳3544个座席，柔道、
摔跤比赛将在这里举行。（点3）
大学城华南师范大学体育馆，位于广州大学城，亚运会手球项目将在这里举
行，届时最多可容纳3871个观众观赏精彩比赛。（点4）
大学城广州大学体育馆，位于广州大学城，最多可容纳2612名观众。亚运会击
剑项目将在这里举行。（点5）
大学城广东工业大学体育馆，位于广州大学城，场馆能容纳近4200个座席，
这里将举办手球比赛。（点6）
大学城广东工业大学板球场，位于广州大学城，场馆能容纳4974个座席，届
时板球比赛将在这里举行。（点7）
3
生态学实验讲义 使用班级：生物科学08级/能源与环境生物技术08级
大学城广东外语外贸大学体育馆，位于广州大学城的广外体育馆可容纳4415
个名观众，亚运会的排球项目将在这里举行。（点8）
大学城广东药学院体育馆，位于广州大学城的广药体育馆可容纳4735个座席，
亚运期间排球比赛也将在这里举行。（点9）
大学城铁人三项赛场，位于广州大学城，曾于08年承办了第17届亚洲铁人三项
锦标赛。场地可容纳2648名观众，亚运期间将举行公路自行车赛和铁人三项项目。（点10）
广州大学城体育中心体育场，位于广州大学城，改建后场馆可容纳
座席。该场馆在亚运会期间将承办足球和橄榄球项目。（点11）
37784个
广州自行车轮滑极限运动中心，位于广州大学城，小轮车、场地自行车和轮
滑项目将在这里举行，届时可容纳4000个观众欣赏赛事。（点12）
附2：GB/18883-2002（室内空气质量）实施标准：
级别 污染程度 大气微生物 大气细菌 1 清洁 <3000 <1000 2 较清洁 3001-5000 1001-2500 3 微污染 5001-10000 2501-5000 4 轻度污染 10001-15000 5001-10000 5 中度污染 15001-30000 10001-20000 6 重度污染 30001-60000 20001-45000 7 极重度污染 >60000 >45000
大气霉菌
<500 501-750 751-1000 1001-2500 2501-6000 60001-15000 >15000
附3
细菌和真菌分别参照《常见细菌系统鉴定手册》和《真菌鉴定手册》进行菌种鉴定。注两本书可在baidu中搜索获得。
实验作业
1．请列出两类平板生长细菌和真菌进一步鉴定的技术路线以及可行的实验步骤。
2．在广东药学院电子期刊数据库中阅读“空气微生物”和“空气微生态”相关文献，结合实验完成本实验报告。
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