一、雄蜂和处女王的选择 雄蜂的质量关系着授精后蜂王的质量，与发育充分，体质健壮，无病害等优质雄蜂受精后，蜂王不但开产的时间早，而且产卵旺盛，维持正常产卵的时间也长。捕捉雄蜂的时间最好在中午12时之后至15时之前，在蜂群的巢门口选参加婚飞归巢的雄蜂。性成熟的雄蜂行动敏捷，进巢迅速，因此，须在巢门口设置隔雄栅等障碍，才易于捕捉，凡腹部坚实又较小的，多数是性成熟雄蜂。腹部松软的，较大的，多未成熟。婚飞归巢的雄蜂兴奋度较高，捕捉时若指力过大或受到压挤，其体内阳茎则立即外翻并射精，所以要注意轻拿轻放。授精前要对处女王进行选择，一般是以个体大，腹部硕长，行动稳健活泼的处女王为佳。适宜处女王授精最佳时期为10～13日龄，也就是说处女王出房后10～13日。如果授精过早，由于处女王未到性成熟期，虽然已经授精，但精子转移到蜂王贮精囊的速度较慢，精液在蜂王输卵管内滞留时间较长，授精蜂王迟迟不能产卵，有的精液在蜂王输卵管内变质导致蜂王死亡。若授精过晚，处女王在核群及框式王笼内时间过长，影响核群及框式王笼的使用效率。
二、仪器设备及消毒灭菌方法 主要仪器设备有实验台、药品柜、蒸馏水器、体视显微镜(工作距离100毫米左右)、生物显微镜(1600×)、蜂王人工授精仪、微量注射器、高压灭菌锅、雄蜂笼、酒精灯、电炉、二氧化碳钢瓶、胶管、常用玻璃器皿、注射器及日常用品。实验室地面用5%来苏儿喷洒消毒;实验室空间则用紫外线灯灭菌15分钟。实验台面用75% 酒精擦拭。耐高温的授精器械和附件用高压灭菌锅灭菌15～20分钟，不耐高温的器械用75%的酒精擦拭或灌洗灭菌。塑料注射针头等用酒精消毒灭菌后，再用无菌蒸馏水加压冲洗5～6遍。
三、采集雄蜂精液及注意事项 采集雄蜂精液前先强迫排精。当一切准备工作就绪时，在飞翔笼中捉出飞翔有力，腹部较坚实的雄蜂，通过手向腹部尾端施加压力，使腹腔的血淋巴挤压内阳茎，迫使阳茎渐次外翻。当阳茎球末端冒出淡黄褐色精液时，停止挤压。在加压时用力要稳妥，切勿操之过急，如用力过大，容易导致精液飞溅或阳茎球破裂。同时还要注意不要让外翻的阳茎球及精液接触到雄蜂体表面及操作者的手指，以及造成污染。随即用微量采精器采集球面上的精液。首先将采精器吸入一小段空气，使稀释液与精液有气泡相隔，以免精液混入大量稀释液。但吸入的气泡不能太大，如果吸入空气较大，在采集精液或以后授精过程中受到阻力时;空气会膨胀和压缩变形，给采集精液或授精带来不便，采集精液时，针尖要贴紧精液的表面，但又不能过深，以免将黏液吸入。采集完第一只后，再采集下一只雄蜂精液时，将前一只雄蜂精液推出针尖外一少部分，使其与准备采集的精液面相接触，这样既可防止吸入空气，又可减少吸入黏液的机会。一旦发现吸入黏液要尽快排出，哪怕是稀黏液也不可以混入精液吸入针头内。因为黏液不仅会堵塞针头，如注射到蜂王侧输卵管后会凝固而堵塞输卵管，这样不仅影响精子进入贮精囊，而且还会造成蜂王死亡。采集精液结束时，针头内仍然要吸入一段空气，再用稀释液封口，以免针口因精液凝固而堵塞。
四、授精及操作要求 授精要求进针角度合适，部位准确。生殖道无损伤，操作过程无污染，授精量足，操作速度快。首先把装有处女王的麻醉室固定在授精仪的麻醉室固定夹上，并调节工作距离，同时移动授精仪(或显微镜)使处女王的腹部呈现在视野中央，调节至清晰为止。待处女王通过麻醉进入昏迷状态时，移动授精仪的背、腹钩操纵杆，打开交配腔。这时，将背钩伸到蜂王螫针鞘基部，并让它嵌入基部的三角缝内。背钩嵌入后，再一次调整背、腹钩，把背腹板的距离拉开。此时即可看到交配腔中央靠近螫针鞘基部有一皱褶开口，该开口就是荫道口，移动注射器，排去针头前端的保护液及气泡，继而施动纵向导轨使针尖接近荫道口，将荫道探针插入荫道，压住荫道瓣突，使荫道口扩张。再调节纵向导轨使针尖沿着探针的背部徐徐进入荫道，直至中输卵管，取出探针。当进针深度达1.8毫米时，略感到受到阻力后停止进针，然后将针头稍退出一点，开始注射精液。一次性授精通常注射8微升;二次性授精每次各注射4～5微升精液。第一次与第二次授精间隔时间为24～48小时。注精完毕，稍待10～15秒后退出针头，卸下麻醉室，小心退出蜂王，给蜂王作上标记，待苏醒后送回原核群。
五、授精蜂王的管理 授精蜂王的管理，是指授精后至开始产卵这段时间的管理。蜂王人工授精是人工操纵器械完成的，蜂王没有经过婚飞，虽然进行了授精，但是人工授精后的蜂王仍然会飞出巢外进行自然交尾活动。因此，必须采取相应的管理措施，防止蜂王再次自然交尾。目前控制人工授精蜂王出巢再交尾，多数是采取在小核群的巢门口安装隔王珊或脱粉片的方法，控制蜂王飞出巢外。