盐溶蛋白电泳检验玉米纯度是目 前成本较低且较为简便的检验方法， 是实际检验过程中常用的方法。根据 实际检验工作中的操作过程，总结几 供一些帮助。 １ 溶液配制 三氯乙酸５０ ｇ加蒸馏水，定容至５００ ｍｌ。 配制以上药物需要注意药量的精准度。每种药 的计量必须严格按照配方要求执行，如有偏差会导 致分离胶或浓缩胶处于不凝固或半凝固状态，致使 制，再倒入相应的容量瓶定容。在倒入容量瓶时， 应注意把烧杯的液体倒入定容器后，再用塑料洗瓶 清洗一下烧杯，确保无残留药液，最后再定容至标 准规定的用量。 ２样品制备 点需要注意的问题，希望能给大家提 盐溶蛋白电泳检验实验不能正常进行。所有贮备液都需要在烧杯里配 玉米种子纯度操作１．１ 电极缓冲液。称取甘氨酸６ ｇ，倒 入烧杯中，加入１ ８，００ ｍｌ去离子水溶 解，用２ ｍｌ乳酸调至ｐＨ为３．３，再加 去离子水定容至２ ０００ ｍｌ，混匀。 １．２样品提取液。先把蒸馏水１ ０００ ｍｌ 按ＧＢ／Ｔ３５４３．２的要求，从送验样品中随机分 取玉米种子至少８０粒，用单籽粒粉碎器粉碎，放 烧至微沸，放至室温，待用。称取氯 化钠ＮａＣ１ ５．８ ｇ，蔗糖１９０ ｇ（范围１８Ｏ～ ２００ ｇ），甲基绿０．１ ｇ（有明显颜色即 可），倒入烧杯中，加蒸馏水溶解，加 热至微沸，定容至１ ０００ ｍｌ。在４￣Ｃ条 件下保存。 １－３分离胶和浓缩胶。①贮备液Ａ： （需带乳胶手套）９０ ｇ丙烯酰胺＋３ ｇ Ｎｌ一亚甲基双丙烯酰胺，加入３５０ ｍｌ 蒸馏水（搅拌约３０ ｍｉｎ），定容至 ５００ｍｌ。②贮备液Ｂ：１．１４ｍｌ乳酸钠＋ ３．８ ｍ１乳酸，定容至１００ ｍｌ。⑧贮备液 Ｃ：０．２ ｇ Ｖｃ（分析纯）＋０．００３ ｇ硫酸亚 铁ＦｅＳＯ （分析纯），定容至２００ ｍｌ。④ 贮备液Ｄ：０．０９７ ｇＶｃ＋０．００１ ｇ硫酸亚 铁ＦｅＳＯ （分析纯），定容至５Ｏ ｍｌ。⑤ 贮备液Ｅ：０．５７ ｍｌ乳酸钠（分析纯）＋ Ｏ．０３ ｍｌ乳酸（分析纯），定容至５０ ｍｌ。 ⑥贮备液Ｆ：（需带乳胶手套）２．０ ｇ Ｎ’一 亚甲基双丙烯酰胺＋１２ ｇ丙烯酰胺＋ ６０～７０ ｍｌ（搅拌约３０ ｍｉｎ），定容至 １００ ｍｌ。⑦贮备液Ｇ：３０％的Ｈ２０ １．００ ｍｌ，加９ ｍｌ蒸馏水。（注：①～⑦ 各种药贮于棕色瓶中，在４℃条件下 保存，不超过１４ｄ。） 取胶比例：分离胶Ａ：Ｂ：Ｃ为 ５：１：２（５０ ｍｌ：１０ ｍｌ：２０ ｍ１），稍大 的量杯，在４℃条件下保存，有效期 ５ ｄ。浓缩胶Ｄ：Ｅ：Ｆ为１：１：２（１ｏｍｌ： １０ｍｌ：２０ｍ１），稍小的量杯，在４℃条 件下保存，有效期５ ｄ。 １．４染色液。称取考马斯亮蓝Ｒ一２５０ １．ｏ０ ｇ，在研钵中用５０ ｍｌ无水乙醇研 磨溶解，过滤于棕色瓶中。１０％（ｗ／ｖ） 入１．５ ｍｌ离心管中，用滴管加入比样品体积稍多 （一般加样品的２／３）的样品提取液。（注：样品提取 液会被样品吸收，提取液过少会导致点样时不能吸 取足够的样品上清液，提取液过多又会影响谱带， 会引起谱带不明显、特征区不易分辨等问题。）充 分摇匀，放置４０ ｍｉｎ，再用离心机离心１５ ｍｉｎ ｏ没 有离心机的多放置一段时间亦可，但需注意在点样 时一些碎末可能会粘在移液器上，使样品点不进样 品槽。 ３制凝胶板 ３．１胶室制备。将预先洗净晾干的玻璃板装入胶 条中，然后把胶条固定在垂直板电泳槽内，保持水 平，短板向正极，拧紧螺栓，备用。 ３．２封底缝。用小量杯取２０ ｍｌ±５ ｍ１分离胶＋１５ 或２０ １的贮备液Ｇ，从长玻璃板之间倒入，一边 一半，等２～３ ｍｉｎ凝固。 ３－３灌分离胶。底缝封住后，用滤纸条插入两玻 璃板之间，吸去因聚合而析出的水；用小量杯取 ２０ ｍｌ±５ ｍ１分离胶＋１５或２０ １的贮备液Ｇ，倾 斜电泳槽，将分离胶溶液倒入两玻璃板之间，高度 距短玻璃板上沿ｌ～２ ｃｍ；放平电泳槽并在试验台 上振动３次后，用滤纸吸干。 ３．４灌浓缩胶。用小量杯取ｌ０ ｍｌ浓缩胶＋１５或 ２０ ｌ贮备液Ｇ，迅速搅匀，倒入两玻璃板之间， 马上插好样品梳，样品梳底部距分离胶顶部０．５ ｃｍ。 等凝固（胶体发白），把样品梳慢慢拔出来，注意要 两边一起拔，不能弄坏里面的样品槽。 贮备液Ｇ的作用是使浓缩胶和分离胶快速凝 固。一般操作时可用ｌ５或２０ ｌ，初学者可以用 １０或１５ ｌ，使凝固速度减慢，从而可以轻松的完 成下一步操作。灌胶时，可用长针管把多余液体抽 干，也可在长短板之间插入滤纸把多余的液体吸 干。浓缩胶要保证０．５ ｃｍ的高度，确保样品能充 分加入。样品梳必须清洗干净再插入浓缩胶，否则 三种常规药剂防治大棚黄瓜霜霉病的效果试验 鹿泉市蔬菜种植以温室蔬菜、大棚菜、露地菜 选用３种常规药剂均是以防控为主，结合天气 情况、植株长势及管理情况，采用叶面喷施方式， 于３月３０日、４月１５日、４月２８日喷施３次。分 别于喷施后第５ ｄ观察表现，记录数据。 ３种随季节变化而形成多年种植特色。其中，大棚 黄瓜是本市目前种植面积大，且种植较多的品种之 一。然而，随着品种的不断变化，农药也逐步成熟 化。霜霉病不仅是大棚黄瓜也是温室、露地菜的常 见病害，是制约产量上升的瓶颈。因此，农户在选 择药剂防治时要谨慎，要分清防与治的区别，掌握 因２０１３年３月份倒春寒持续时间长，３种常 规药剂防控病害时均以喷施叶面肥为主。在３月底 左右施药后第５ ｄ观察表现性状，均为无病害发 最佳用药时期，药剂选择要对路，指导农户要打破 生；４月中上旬施药后第５ ｄ观察表现性状，抑快 常规，节约成本，利用最少的投资获得最大的收 净水分散粒剂药效好于安克锰锌，安克锰锌药效好 益，做到科学有序的防控病害。 于甲基托布津；在４月底～５月上旬施药后第５ ｄ １ 试验安排 观察表现性状，抑快净水分散粒剂药效好于甲基托 １．１ 试验地点。大河镇城东桥东队曹江红大棚内 布津，甲基托布津药效要好于安克锰锌。 （１．５亩）。 ． ３试验结果 １．２供试品种。新农村。 综上表现，３种常规药剂中抑快净水分散粒剂 １．３试验药剂。①安克锰锌，②甲基托布津，③ 药效要好于安克锰锌、甲基托布津。因此，农户在 抑快净水分散粒剂。 前期防控霜霉病时要优先选择抑快净水分散粒剂。 ２试验方法 当然，也需要根据品种的抗病性、地理差异等外部 选取任意相邻或相近３行，施用３种不同药剂 条件来选择。 进行对比。 ０５０２００河北省鹿泉市农牧局 李向前武雪燕 拔出时浓缩胶容易粘连，电泳时易串样、混样。 恒温条件下染色２～４ ｈ。 ４点样 ８洗板 浓缩胶聚合后，拔出样品梳并将样品槽清理干 取出胶片，用０．５％的不加酶洗衣粉水洗净。 净 用微量点样器在每个样品槽中加入不同籽粒的 ９清洗 样品上清液，将移液器调到３０ ｌ，每点一粒后， 实验完成后，清洗实验用品。清洗玻璃板时， 都要用去离子水清洗移液器３次。 一定要用软毛刷或软布，否则容易使玻璃板出现划 ５ 电泳 痕，清洗时加入几滴洗洁精更容易将残留的凝胶洗 加样完毕后，倒入电极缓冲液，上槽电极缓冲 掉。盛样品的小塑料离心管最好放入装有稀释了的 液面要高于短玻璃板，下槽电极缓冲液面要高于铂 洗衣粉液里浸泡，这样可使被染上的提取液颜色很 金丝；将电源线正极接上槽，负极接下槽（红接红， 容易洗掉。 黑接黑）；接通电源，采用５００ ｖ稳压进行电泳，待 １０结果计算 甲基绿指示剂下移至胶底部边缘时，关闭电源ｆ大 １０．１ 电泳测定值计算。待整个供检样品电泳结束 约３６ ｍｉｎ）。 后，在观片灯上鉴定胶片上电泳谱带的特征和一致 电泳时，一定要注意电泳仪和电泳槽的正、负 性，计数供检样品粒数和非本品种粒数，并按下式 极不要接反，否则整个实验就会前功尽弃。 计算电泳测定值。 ６卸板 ）＝ Ⅷ０％ 倒出电极液（可重复使用，当液体浑浊时不能 再用），从电泳槽内取出胶室，卸下封底胶条，启 ｌ０．２样品纯度值计算。将电泳测定值ｘ代入回归 开玻璃板，用长针慢慢滑过胶底，使胶片与玻璃板 方程Ｙ＝５２．９＋０．４６ｌＸ中，计算出样品纯度值，再 分离，取出胶片，浸入染色液中。 与ＧＢ４４０４．１中的纯度值进行比较，判定样品是否 ７染色 合格。 往大白方盒里倒入三氯乙酸＋考马斯亮蓝（能 ０５００５１ 国家半干旱农业工程技术研究中心 泡住胶片即可），一般染色时间为７—８ ｈ，在３Ｏ℃ 杨 京赵会薇李军虎 ・５３・