【实验目的】 掌握蛙类的捉拿和破坏脑脊髓的方法，掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备技术、获得兴奋性良好的标本。
【实验原理】 蟾蜍及蛙类的一些基本生命活动与哺乳动物相似，又因其离体组织在短时间内所需的生活条件简单，易于控制和掌握，因此在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观察兴奋和兴奋性、刺激与反应及肌肉收缩等基本生理现象。因而制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验中必须掌握的一项基本技能。
【实验对象】 蟾蜍或青蛙。
【实验用品】 蛙类手术器械一套，（普通剪刀、手术剪刀、眼科剪、组织镊子、眼科镊子、探针、锌铜弓、玻璃分针、蛙板、玻璃板、蛙钉）任氏液、方瓷盘、培养皿、棉线、纱布、滴管等。
【实验步骤】
1.破坏脑和脊髓 取蟾蜍一只，用左手握住蟾蜍，食指按压头部前端，拇指按压背部，使头部前俯；右手持金属探针由头端沿中线向尾方划触、触及凹陷处即枕骨大孔的所在。将探针由凹陷处垂直刺入2~3mm，刺破皮肤即入枕骨大孔，这时将探针尖端水平转向头方，向前探入颅腔内，然后向各方搅动探针，以捣毁
脑组织。脑组织捣毁后，将探针退出；再由枕骨大孔刺入，并水平转向尾方，与脊髓平行刺入椎管，来回抽动探针以彻底破坏脊髓。当动物四肢肌肉的紧张性完全消失时，提示脑和脊髓完全破坏（见图2-1）。
2.剪除躯干上部及内脏 在骶髂关节水平以上1～1.5cm处剪断脊柱。左手握止蟾蜍后肢、用拇指压止骶骨，使蟾蜍头与内脏自然下垂，右手持普通剪刀（严禁用手术剪剪骨骼），沿脊柱两侧剪除一切内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、脊柱以及紧贴于脊柱两侧的坐
骨神经。剪除过程中注意勿损伤坐骨神经。
3.剥皮 左手握紧脊柱断端（注意不要握住或压迫神经），右手捏住其上的皮肤边缘、用力向下剥掉全部后肢的皮肤（图2-2 ）
4.清洗 把剥皮后的标本放在盛有任氏液的培养皿中。将手及用过的剪刀、镊子等全部手术器械洗净，再继续下面步骤。注意剥皮后的标本不能用自来水冲洗。
5.分离两腿 用镊子夹住脊柱标本背面朝上，剪去向上突起的尾骨（注意勿损伤坐骨神经）。然后沿正中线用剪刀从脊柱和耻骨联合中央剪开标本，并将两条蛙腿浸入盛有任氏液的培养皿中。
6．游离坐骨神经 取一条蛙腿腹面朝上放置在蛙板上的玻璃片上，用蛙钉将标本的脊柱固定在蛙板上，趾蹼朝上拉直下肢并用蛙钉固定在蛙板上，用玻璃分针沿脊柱旁游离坐骨神经至尾骨处、再沿坐骨神经沟（股二头肌和半膜肌之间的裂逢处），找出坐骨神经的大腿段，用玻璃分针仔细剥离，剪断坐骨神经的所有分支（但不要伤及神经干），并将神经分离直至膝关节腘窝处。继之沿股骨剥离股部所有肌肉并从膝关节起剪去这些肌肉，以粗剪刀在股骨上中1/3处剪断股骨，剪下一小段与神经相连的脊柱（约1～2个脊椎骨）。
7．分离腓肠肌 用玻璃分针将腓肠肌跟腱分离，并穿线在跟腱处结扎。在结扎远端用粗剪刀剪断跟腱，左手执线提起腓肠肌，以手术剪刀剪去其周围联系的组织，但保留腓肠肌起始点与骨的联系，在膝关节下将小腿其他部分剪掉，留下的即为坐骨神经腓肠肌标本（图2-3）。
8．检查标本的兴奋性 用经任氏溶液润湿的锌铜弓轻触一下坐骨神经的中枢端，如腓肠肌发生迅速而明显的收缩，则表明标本的兴奋性良好，即可将标本放在盛有任氏液的培养皿中备用。
【注意事项】
1.操作中尽量使用器械，少用手直接牵拉标本。
2.避免用金属器械碰夹神经。用玻璃分针分离神经时应顺着坐骨神经的走向由中心向外周，操作必须精细，以免损伤神经。
3.所用的器械要洁净，接触蛙皮肤，特别是蟾蜍皮肤的用具必须洗净后再使用。 4.剥皮时，手不要碰触脊柱旁的坐骨神经，以免损伤。
5．应经常用任氏液湿润标本，保持其兴奋性。 【思考题】
1.制备坐骨神经腓肠肌标本为何先破坏脑及脊髓？该项操作你有何体会？如何判断脑和脊髓的完全破坏？
2．在实验中制备兴奋性良好的标本必需注意哪些问题？你制备的坐骨神经腓肠肌标本的兴奋性如何？
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