医堂 Ｑ 生８月—第 卷第８期 ２０１２，９（７）：４９４—４９６． ＭＯＤＥＲＮ ＯＮＣＯＬＯＧＹ．Ａｕ ２０１３．ＶＯＬ．２１．ＮＯ．０８ ・１８０１・ ［９］曹海根，王金锐．实用腹部超声诊断学［Ｍ］．北京：人民卫生出 版社，２０１１：５７３—５７８． ［７］钱晓军，戴定可，翟仁友，等．恶性梗阻性黄疸介入治疗并发症 分析及其防治的探讨［Ｊ］．实用放射学杂志，２００７．２３：１３７１— １３７４． ［１０］陈永超，连娟，罗福成，等．经皮肝胆管穿刺置管术治疗恶性肿 瘤致胆道梗阻的临床价值［Ｊ］．实用肝脏病杂志，２００９，１２ （４）：２７１—２７３． （编校：谈静） ［８］王凤燕，李肖．恶性梗阻性黄疸的介入治疗［Ｊ］．实用肝脏病杂 志，２０１２，１５（４）：３７４—３７６． ＭＤＭ２基因多态性与肝细胞肝癌易感性的关系研究 王 霞，张广亮，张一帆，孙霞，杨 阳，禹立霞，丁 慧，刘宝瑞，钱晓萍 Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ＭＤＭ２ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ） Ｗａｎｇ Ｘｉａ，Ｚｈａｎｇ Ｇｕａｎｇｌｉａｎｇ，Ｚｈａｎｇ Ｙｉｆａｎ，Ｓｕｎ Ｘｉａ，Ｙａｎｇ Ｙａｎｇ，Ｙｕ Ｌｉｘｉａ，Ｄｉｎｇ Ｈｕｉ，Ｌｉｕ Ｂａｏｒｕｉ，Ｑｉａｎ Ｘｉａｏｐｉｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｎｅｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｄｒｕｍ Ｔｏｗｅｒ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｆＮａｎｏｊｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｆ ｏＯｎｅｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｄｒｕｍ Ｔｏｗｅｒ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＮａ ｎｇ Ｕｎｗｅｍｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｎａ ｎｇ ２１０００８，Ｃｈｉｎａ． 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ＳＮＰ（ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ）ｉｎ ＭＤＭ２ （ｍｕｒｉｎｅ ｄｏｕｂｌｅ ｍｉｎｕｔｅ ２）ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｗｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ＭＤＭ２ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｆｒｏｍ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ １６６ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＨＣＣ ａｎｄ １５７ ｃａｎｃｅｒ——ｆｒｅｅ ｈｅａｌｔｈｙ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｃｏｎ．． ｓｅｃｕｔｉｖｅｌｙ．Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ＭＤＭ２ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｂｙ ＳＹＢＲ ＧＲＥＥＮ ＰＣＲ ｗｉｔｈ Ｔｍ—ｓｈｉｔｆ ｐｒｉｍｅｒｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ａｌｌｅｌｅ ｒｆｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ｃａｓｅ ｓｕｂｊｅｃｔｓ（Ｔ，０．４９；Ｇ，０．５１）ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｕｂｊｅｃｔｓ（Ｔ，０．５９； Ｇ，０．４１）（Ｐ＝０．０１５）．Ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ ＧＧ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｔｈｅ ＳＮＰ３０９ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＨＣＣ（２２．２９％）ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆ— ｃａｎｄｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｏｐｌｅ（１３．３８％）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＭＤＭ２ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ＳＮＰ３０９ Ｇ ａｌｌｅｌｅ ｏｒ ＧＧ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｎｓｅｔ ｏｆ ＨＣＣ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ；ＭＤＭ２；ＳＮＰ；ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｍｏｄｅｍ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１３，２１（０８）：１８０１—１８０４ 【摘要】 目的：探讨小鼠双微体基因（ｍｕｒｉｎｅ ｄｏｕｂｌｅ ｍｉｎｕｔｅ ２，ＭＤＭ２）单核苷酸多态性（ＳＮＰ）与肝细胞肝癌易 感性及生物学行为的关系。方法：对１６６例肝癌病例和１５７例健康对照病例的外周血标本，利用ＳＹＢＲ ＧＲＥＥＮ ＰＣＲ溶解曲线法分析ＭＤＭ２基因型。结果：实验组等位基因的发生率（Ｔ，０．４９；Ｇ，０．５１）与对照组基 因的发生率（Ｔ，０．５９；Ｇ，０．４１）（Ｐ＝０．０１５）有统计学差异。肝癌患者中ＧＧ基因型的发生率（２２．２９％）高于 健康人群（１３．３８％）（Ｐ＝０．０１０）。结论：与１Ｔｒ基因型相比，携带Ｇ等位基因或ＧＧ型与肝癌发生的相 关性较大。 【关键词】肝细胞肝癌；ＭＤＭ２；单核甘酸多态性；易感性 【中图分类号】Ｒ７３５．７ 【文献标识码】Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—４９９２．２０１３．０８．４４ 【文章编号】１６７２—４９９２一（２０１３）０８—１８０１—０４ 肝细胞肝癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，简称肝癌）是第五 【收稿日期】 ２０ｌ３—０２—２８ ２０１０３５） 【基金项目】 江苏省卫生厅项目（编号：大常见肿瘤，在恶性肿瘤中其致死率位列第三。全球每年大 约会有６６．７万新发病例及５５万患者死于该病…。由于地 理位置的不同，肝癌发生率有很大差别，其中以非洲、东南亚 及我国多见 Ｊ。肝癌的发生是一个多步骤发展的长期累积 【作者单位】 南京医科大学附属鼓楼临床医院肿瘤中心，南京大学 医学院附属鼓楼医院肿瘤中心，江苏南京２１０００８ 【作者简介】 王霞（１９８８一），女，江苏泰州人，在读硕士研究生，主 要从事肿瘤个体化治疗的研究。Ｅ—ｍａｒｌ：ｔｕｔｕ０４１６＠ １６３，ｃｏｎ 结果，涉及多种危险因素，目前已经确认的有ＨＢＶ及ＨＣＶ 感染、致癌物质的暴露（如黄曲霉素、过量饮酒）及一系列遗 传因素 。Ｊ。而且不同地区的肝癌患者的常见危险因素也 并不相同。除日本外的东南亚及非洲地区肝癌患者多有乙 肝，而日本及欧美则为丙肝。尽管ＨＢＶ及ＨＣＶ感染是公认 肝癌发生的主要原因，但肝炎病毒感染人群中仅有一小部分 【通讯作者】 钱晓萍（１９６５一），女，安徽庐江人，博士生导师，主任 医师，主要从事恶性肿瘤耐药性的研究工作。Ｅ— ｍａｉｌ：ｑｉａｎｘｉａｏｐｉｎｇ２ｌ１＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ ・１８０２・ 王霞，等 ＭＤＭ２基因多态性与肝细胞肝癌易感性的关系研究 人最终发展为肝癌，这就提示，遗传因素在个体的肝癌易感 性中起着很重要的甚至是决定性的作用。 单核昔酸多态性（ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，ＳＮＰ） 温，彻底晾干吸附柱。将吸附柱转入１．５ｍｌ的离心管中，悬 空滴加５０—２００ 的ＴＢ，室温放置５ｍｉｎ，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心 ２ｍｉｎ，弃去吸附柱，离心管中所得液体即为抽提出的 ＤＮＡ样品 是人类可遗传变异中最常见的一种，在人类基因组中广泛存 在，平均每５００—１０００个碱基对中就有１个。大量存在的 ＳＮＰ位点，使人们有机会发现与各种疾病（包括肿瘤）相关的 基因组突变。ＳＮＰ作为第三代遗传标记，可以更方便快捷的 设计弓ｌ物：引物Ｔ：５ 一ＣＴＡＧＧＧＣＴＧＣＧＧＧＧＣＣＧＡＴｒ一３ 弓Ｉ物Ｇ：５ 一ＧＣＧＧＧＣＴＧＧＧＣＴＡＧＧＣＴＧＣＧＧＧＧＣＣＧＴＴＧ一３ 共同引物Ｃ：５ ＡＣＣＣＧＡＣＡＧＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＣ一３２ 用于药物的设计、生物学的基础研究以及高危群体的筛查 等。近年来，利用ＳＮＰ筛查肝癌等复杂疾病的遗传易感基因 已成为功能基因组学研究领域的重点和热点。 ＭＤＭ２是一种癌基因，能使细胞生存期延长，促进细胞 增生及肿瘤的生长。近年来，国外许多研究显示 ，ＭＤＭ２ 启动子区３０９位点（ｒｓ２２７９７４４）单核苷酸多态性与肝癌的易 感性相关。其原因可能为ＭＤＭ２启动子区３０９位点单核苷 酸多态（３０９Ｔ＞Ｇ）能加强ＳＰ１转录因子的结合能力，从而使 ＭＤＭ２的转录增强和表达增加 Ｊ。但既往研究多为西方国 家患者样本，患者多有丙肝背景，而缺少东方人群或乙肝背 景人群的相关研究，因而本实验针对中国人群作一研究。 本实验对１６６名肝癌患者及１５７名健康体检者，运用 ＳＹＢＲ ＧＲＥＥＮ ＰＣＲ的方法检测其外周血ＭＤＭ２（ｒｓ２２７９７４４ 位点）的多态性，通过比较两个人群中基因型的差异从而分 析ＭＤＭ２多态性与肝癌易感性的关系及与肝癌生物学行为 之间的关系，获得具有重要功能意义的与肝癌遗传易感性相 关的ＳＮＰ或单倍型，为肝癌高危人群的筛查及肝癌的治疗提 供实验室依据及理论基础。 １材料与方法 １．１实验材料 提取血细胞基因组ＤＮＡ试剂购自ＴＩＡＮＧＥＮ公司。 ＳＹＢＲ ＧＲＥＥＮ试剂购自ＴａＫａＲａ，日本。荧光定量ＰＣＲ仪为 美国Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ公司Ｍｘ３０００Ｐ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ。低温 冷冻超速离心机来自德国Ｓｉｇｍａ公司。电热恒温水浴槽购 自上海精宏试验设备有限公司，ＤＫ一８Ｄ型。１．５ｍｌ微离心 管及２０ｔｘｌ、２００￣１、１０００ｔ￣１吸头购自美国Ａｘｙｇｅｎ公司。 １．２研究对象 本实验病例组标本采自２００８年至２０１２年在南京大学 医学院附属鼓楼医院普外科住院手术治疗的新发肝癌患者， 无年龄及性别限制，所有病例经病理学确诊，既往无肿瘤病 史，未行肿瘤相关的放射线治疗及化疗。最终入组的有１６６ 例，男１３３例，女３３例，年龄２２—８３岁，中位年龄５５岁。 对照组为同时期从鼓楼医院体检中心随机筛查的１５７ 位无肿瘤疾病及肿瘤家族史的健康人。其中男８８例，女６９ 例，年龄２Ｏ一８２岁，中位年龄５２岁。病例组和对照组无亲 缘关系。 １．３ ＤＮＡ抽提及ＭＤＭ２基因型分析 ＤＮＡ提取：取ＥＰ管，加入２００ｔ￣１全血及２０Ｉｘｌ蛋白酶Ｋ， 混匀，加人２００ｔｘｌ缓冲液ＧＢ，颠倒混匀后离心，５６％孵育 １０ｍｉｎ，期间数次混匀，直至溶液变清亮。加入２００Ｉｘｌ无水乙 醇，充分颠倒混匀后加入吸附柱中，外套收集管，１２００Ｏｆ／ｒａｉｎ 离心１ｍｉｎ，倒掉收集管中的液体，向吸附柱中加入５００ Ｉｘｌ ＧＤ，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１ｒａｉｎ，倒掉收集管中的液体，向吸附柱 中加入６００ｔｄ缓冲液Ｐｗ，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１ｍｉｎ，倒掉收集管 中的液体，再重复加入６００￣１缓冲液ＰＷ，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心 １ｒａｉｎ，倒掉收集管中的液体，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心２ｍｉｎ，置于室 配制ＳＹＢＲ ＧＲＥＥＮ ＰＣＲ反应体系：ＳＹＢＲ ＧＲＥＥＮ Ｍｉｘ １０ ，ＭＤＭ２引物Ｔ ０．１ｐ．１，ＭＤＭ２引物Ｇ ０．２１ｘｌ，ＭＤＭ２共同 引物Ｃ ０．２１ｘｌ，ＤＮＡ样品２ｔｘｌ，去离子水７．５ ，共计２０Ｉｘｌ。 进行荧光ＰＣＲ检测，最佳扩增条件：９５℃１ｒａｉｎ，１个循 环；９５℃１ｍｉｎ，１个循环；９５ｑＣ １ｍｉｎ，１个循环；９５℃１ｍｉｎ，１ 个循环；９５℃２０ｓ，５８℃１ｍｉｎ，７２℃３０ｓ，１个循环。 １．４统计学分析 采用ＳＰＳＳ １７．０统计软件包处理数据，ＭＤＭ２各基因型 与临床病理参数相关性分析采用ｘ 检验，检验水准 ＝ ０．０５，Ｐ＜０．０５，有统计学差异，Ｐ＜０．叭，有显著统计学差异。 ＭＤＭ２各基因型与肝癌的易感性分析以比值比（ＯＲ）及可信 区间（ＣＩ）表示，ＯＲ值以非条件Ｌｏｇｉｓｔｉ００ＩＩｏ０∞ａＪ０量 ｃ回归法计算，所有统 计采用双侧概率检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２实验结果 咖咖咖 湖枷姗珈 ０ ２．１ ＳＹＢＲ ＲＥＥＮ ＰＣＲ熔解曲线法检测结果 已知基因型的样本作为阳性对照，以去离子水作为阴性 对照。ＭＤＭ２溶解曲线见图１。 １ １ 一 ｙ Ｉ ６Ｏ ６２ ６４ ６６ ６８ ７０ ７２ ７４ ７６ ７８ ８０ ８２ ８４ ８６ ８８ ９０ ９２ ９４ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（℃） 图１ ＭＤＭ２溶解曲线 绿色曲线表示 ＩＴＩ＇基因型；红色曲线表示ＧＧ基因型；蓝色曲线 表示ＴＧ基因型；灰色曲线表示阴性对照。 Ｆｉｇ．１ ＭＤＭ２ Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ｃｕｒｖｅ Ｇｒｅｅｎ ｃｕｒｖｅｓ ＴＴ ｇｅｎｏｔｙｐｅ；Ｒｅｄ ｃｕｒｖｅ ｔａｂｌｅ ＧＧ ｇｅｎｏｔｙｐｅ；Ｂｌｕｅ ｃｕｒｖｅ ＳＨＯＷＳ ｔｈｅ ＴＧ ｇｅｎｏｔｙｐｅ；Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｓ ｓｈｏｗｎ ｉｎ ｇｒａｙ． ２．２ ＭＤＭ２ ＳＮＰ等位基因分布 病例组中ＭＤＭ２ ＧＧ基因型有３７例（２２．２９％），ＴＧ基因 型９４例（５６．６３％），ＴＦ基因型３５例（２１．０８％）；Ｔ基因频率 为４９．４０％（１６４／３３２），Ｇ基因频率为５０．６０％（１６８／３３２）；对 照组中，ＧＧ基因型有２１例（１３．３８％），ＴＧ基因型８７例 （５５．４１％），Ｔｒ基因型４９例（３１．２１％）；Ｔ基因频率为 ５８．９２％（１８５／３１４），Ｇ基因频率为４１．０８％（１２９／３１４），两组 分布差异无统计学意义（Ｐ＝０．７５３），见表１。 ２．３ ＭＤＭ２ ＳＮＰ与肝癌遗传易感性的关系 病例组中ＭＤＭ２ ＴＹ型的频率为２１．０８％（３５／１６６），ＴＧ 型的频率为５６．６３％（９４／１６６），ＧＧ型的频率为２２．２９％（３７／ １６６）。对照组中ＭＤＭ２ Ｔｒ型的频率为３１．２１％（４９／１５７）， ＴＧ型的频率为５５．４１％（８７／１５７），ＧＧ型的频率为１３．３８％ 现代肿瘤医学２０１３年８月 第２１卷第８期 ＭＯＤＥＲＮ ＯＮＣＯＬＯＧＹ，Ａｕｇ．２０１３，ＶＯＬ．２１，ＮＯ．０８ ・１８０３・ （２１／１５７）。经分析，病例组中ＧＧ＋ＴＧ基因型的个体发 生ＨＣＣ的风险是ｒＩ’Ｉ１个体的１．６９８倍（９５％ＣＩ＝１．０２７— ２．８０８）。结身 ，携带Ｇ等位基因个ｆ４嗯Ｈｃｃ的风险较ＴＴ个 体有增加趋势，且差异有统计学意义（Ｐ＝０．０３８），见表２。 表ｌ ＭＤＭ２ Ｔ／Ｇ等位基因在研究人群中的分布ｎ（％） Ｔａｂ．１ Ｔｈｅ ｄｉｓｔｉｒｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ＭＤＭ２ Ｔ／Ｇ ａｌｌｅｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｐｏｐｕｌａ— ｔｉｏｎ １２（％） 表２ ＭＤＭ２ Ｔ／Ｇ基因型与ＨＣＣ风险的关系ｎ（％） Ｔａｂ．２ Ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＤＭ２ Ｔ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ Ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐ— ｍｅｎｔ ｏｆＨＣＣ ｎ（％） ２．４ ＭＤＭ２ ＳＮＰ与肝癌生物学行为关系 ＭＤＭ２ ＳＮＰ与患者性别、家族史、饮酒、吸烟、肝硬化、结 节大小、结节个数、术前ＡＦＰ、术前ＡＬＴ、术前ＡＳＴ、分期、肿 瘤侵犯肝被膜程度、淋巴结转移、脉管侵犯及免疫组化中ｐ５３ 表达无明显相关性（Ｐ＞０．０５）。 ＭＤＭ２ ＳＮＰ与患者ＨＢＶ感染及肿瘤的分化程度存在相 关性（Ｐ＜０．０５）。３７例ＧＧ基因型患者中ＨＢＶ感染发生率 ７０．２７％（２６／３７），３５例ＴＴ基因型患者中发生率为８８．５７％ （３１／３５），９４例ＴＧ基因型患者中发生率为９０．４３％（８５／９４）。 ３７例ＧＧ基因型患者中低分化为１８．９２％（７／３７），３５例ｒＩＴＩ＇ 基因型患者中发生率为３７．１４％（１３／３５），９４例ＴＧ基因型患 者中发生率为１３．８３％（１３／９４），见表３。 ３讨论 ＭＤＭ２ ＳＮＰ与肝癌患者性别、年龄、分化程度、肿瘤大 小、浸润深度以及肿瘤ＴＮＭ分期等无明显相关性，而与ＨＢＶ 感染及肿瘤分化程度相关。鉴于该ＳＮＰ与病理学相关研究 尚未见报道，相关的确切机制目前也不明确，有待扩大样本 量进行深入研究。 肝癌在亚太人群中是一个常见的疾病，在中国大陆地区 男性肝癌的发生率约为０．０５８％ Ｊ…。但关于ＭＤＭ２ ＳＮＰ３０９ 与肝癌关系的研究相对欧美并不多见，分别来自日本、韩国 和台湾，且结果不尽相同。Ｌｅｕｅｔ【Ｉｌｌ等发现台湾人群中 ＭＤＭ２ ３０９Ｔ＞Ｇ多态性与肝癌易感性没有关系，仅在肝炎病 毒（ＨＢＶ和ＨＣＶ）感染的患者中有肝癌发生率增加的趋势。 而日本¨ 、韩国 １３］却把ＭＤＭ２ ＳＮＰ３０９位点分别作为ＨＣＶ 及ＨＢＶ感染患者肝癌发生风险的预测指标。在美国、摩洛 哥 、挪威、土耳其 等高加索人群研究中也提示ＭＤＭ２ ３０９Ｔ＞Ｇ多态性与肝癌易感性显著相关。肿瘤自身是一个 多因素诱导、多基因参与、多步骤发展的疾病，有很多混杂因 素影响，台湾地区研究结论的不一致可能与样本量的多少、 年龄及性别在病例组和对照组中的匹配、环境影响存 在关系。 表３ ＭＤＭ２ ＳＮＰ与肝癌临床病理参数的相关性（ｎ＝１６６） Ｔａｂ．３ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ＭＤＭ２ ＳＮＰ ａｎｄ ＨＣＣ§ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｂｅｈａｖｉｏｒ （ｎ＝１６６） 本实验研究结果提示，实验组等位基因的发生率 （Ｔ，０．４９；Ｇ，０．５１）与对照组基因的发生率（Ｔ，０．５９；Ｇ，０．４１） （Ｐ＝０．０１５）有明显差别。肝癌患者中ＧＧ基因型的发生率 ・１８０４・ 王霞，等 ＭＤＭ２基因多态性与肝细胞肝癌易感性的关系研究 （２２．２９％）显著高于非肝癌患者（１３．３８％）。与１Ｔｒ基因型 相比，Ｇ等位基因或ＧＧ型与肝癌发生的相关性较大。这个 结论与此前其他国家相关研究结论基本一致。其生物学机 ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅ— ｓｉｓ，２００８，２９：１１９２—１１９６． 制可能为ＭＤＭ２启动子区ＳＮＰ３０９可使ＭＤＭ２转录刺激因 子ＳＰ１活性增加，从而增加ＭＤＭ２ ｍＲＮＡ及蛋白表达，促进 ｐ５３通路的凋亡，使肝癌易感性风险增加 。加拿大学者在 胰腺癌中 研究发现，ＭＤＭ２ ＴＧ型和ＧＧ型较ＴＴ型患者 ［８］Ｅｚｚｉｋｏｕｒｉ Ｓ，Ｅ１ Ｆｅｙｄｉ ＡＥ，Ａｆｉｉｆ Ｒ，ｅｔ １．ＭＤＭ２ ＳＮＰ３０９Ｔ＞Ｇ ａｐｏｌｙ－ ｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌｒ ｃａａｒｃｉｎｏｍａ：ａ ｃａｓｅ—－ｃｏｎｔｒｏｌ ａ－－ ｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ Ｍｏｒｏｃｃａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔ Ｐｒｅｖ，２００９， ３２：３８０—３８５． ［９］Ｂｏｎｄ ＧＬ，Ｈｕ Ｗ，Ｂｏｎｄ ＥＥ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ＰＦＳ减低，Ｇ等位基因多态性使胰腺癌的患病风险上升２—３ 倍，提示ＭＤＭ２多态性不仅与肿瘤易感性相关，也有可能提 示肿瘤的预后。 随着２００１年人类基因组测序工作的完成，目前已经普 遍认识到遗传多态性的研究最有可能揭示肿瘤易感性的本 质。肝癌的发生并非单分子事件，只有当多因素同时发生改 变，产生协同作用才可导致肝癌的发生。此篇文章中我们分 析ＭＤＭ２ Ｇ等位基因及ＧＧ基因型频率在肝癌患者与正常 对照人群中的分布差异，得出ＭＤＭ２ ３０９Ｔ＞Ｇ多态性与肝癌 易感性显著相关这一结论，但ＭＤＭ２ ３０９Ｔ＞Ｇ多态性只代表 了肝癌遗传机制中的某个作用因素，如果能够加强分析与其 他基因甚至环境之间的交互作用，将使我们对肝癌的发生有 更加深刻的了解，从而采取更好的预防及诊断方法。同时， 因为本实验为中国大陆地区第一次关于ＭＤＭ２多态性及肝 癌易感性之间的研究，我们期待亚太地区更大样本量的研究 来证实这一结果。 【参考文献】 ［１］ Ｆａｒａｚｉ ＰＡ，ＤｅＰｉｎｈｏ ＲＡ．Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ： ｆｒｏｍ ｇｅｎｅｓ ｔｏ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，２００６，６：６７４— ６８７． ［２］Ｈｕｉ ＫＭ．Ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｃｏｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｌｅｓ— ｂａｓｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃ－ ｅｒ Ｌｅｔｔ，２００９，２８６：９６—１０２． ［３］ ＭｃＫｉｌｌｏｐ ＩＨ，Ｍｏｒａｎ ＤＭ，Ｊｉｎ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｊ Ｓｕｒｇ Ｒｅｓ，２００６，１３６：１２５—１３５． ［４］Ｔｈｏｒｇｅｉｒｓｓｏｎ ＳＳ，Ｇｒｉｓｈａｍ ＪＷ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，２００２，３１：３３９—３４６． ［５］ Ｅｌ—Ｓｃｒａｇ ＨＢ，Ｒｕｄｏｌｐｈ ＫＬ．Ｈｅｐａｔｃｏｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏ－ ｇＹ ｎａｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００７，１３２： ２５５７—２５７６． ［６］Ｄｈａｒｅｌ Ｎ，Ｋａｔｏ Ｎ，Ｍｕｒｏｙａｍａ Ｒ，ｅｔ ａ１．ＭＤＭ２ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ＳＮＰ３０９ ｉｓ ｓａｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００６，１２：４８６７—４８７１． ［７］Ｙｏｏｎ ＹＪ，Ｃｈａｎｇ ＨＹ，Ａｈｎ ＳＨ，ｅｔ ａ１．ＭＤＭ２ ａｎｄ ｐ５３ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ｔｈｅ ＭＤＭ２ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｔｈｅ ｐ５３ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｐａｔｈ— ｗａｙ ａｎｄ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００４， １１９：５９１—６０２． ［１０］Ｙｕｅｎ ＭＦ，Ｈｏｕ ＪＬ，Ｃｈｕｔａｐｕｔｔｉ Ａ．Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｔｈｅ Ａｓｉａ ｐａｃｉｆｉｃ ｒｅｇｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ，２００９，２４：３４６— ３５３． ［１１］Ｌｅｕ ＪＤ，ＩＪｉｎ ＦＩ，Ｓｕｎ ＹＦ，ｅｔ ａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＤＭ２一 ＳＮＰ３０９ ａｎｄ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌｒａ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ Ｔａｉｗａｎｅｓｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００９，１５：５５９２—５５９７． ［１２］Ｄｈａｒｅｌ Ｎ，Ｋａｔｏ Ｎ，Ｍｕｒｏｙａｍａ Ｒ，ｅｔ ａ１．ＭＤＭ２ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ＳＮＰ３０９ ｉｓ ｓａｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００６，１２：４８６７— ５４８７． ［１３］Ｙｏｏｎ ＹＪ，Ｃｈａｎｇ ＨＹ，Ａｈｎ ＳＨ，ｅｔ ａ１．ＭＤＭ２ ａｎｄ ｐ５３ Ｐｏｌｙｍｏｒ－ ｐｈｉｓｍｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒ－ ｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｕｒｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，２００８，２９：１ １９２—１ １９６． ［１４］Ｅｚｚｉｋｏｕｒｉ Ｓ，Ｅ１ ＦｅｙｄｉＡＥ，Ａｆｉｉｆ Ｒ，ｅｔ ａ１．ＭＤＭ２ ＳＮＰ３０９Ｔ＞Ｇ ｐｏｌ— ｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ａ ｃａｓｅ—ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ Ｍｏｒｏｃｃａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔ Ｐｒｅｙ，２００９， ３２：３８０—３８５． ［１５］Ａｋｋｉｚ Ｈ，Ｓｕｍｂｕｌ ＡＴ，Ｂａｙｒａｍ Ｓ，ｅｔ ａ１．ＭＤＭ２ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｏｌｙｍｏｒ－ ｐｈｉｓｍ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｒａｃｉｎｏｍａ ｉｎ Ｔｕｒｋｉｓｈ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ，２０１０，３４ （４）：４４８—４５２． ［１６］Ｇａｒｅｈｔ Ｌ Ｂｏｎｄ，Ｗｅｎｗｅｉ Ｈｕ，Ｅｌｉｓａｂｅｔｈ Ｅ Ｂｏｎｄ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕ— ｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ＭＤＭ２ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｔｈｅ ｐ５３ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕ－ ｍａｎｓ ｔｕｍｏｒ ｆｏｍｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００４，１１９（５）：５９１— ６０２． ［１７］Ｋｏｆｉ Ａｓｏｍａｎｉｎｇ，Ａｍｙ Ｅ Ｒｅｉｄ，Ｗｅｉ Ｚｈｏｕ，ｅｔ ａ１．ＭＤＭ２ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｒｉｓｋ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００８，１４（１２）：４０１０—４０１５． （编校：谈静）